Набор нитрофурана AMOZ 0.03ppb диагностический ELISA креветки для чувствительности 96Wells/Kit продовольственной безопасности молока

Набор ELISA Nitrofuran AMOZ диагностический для чувствительности молока 0.03ppb 96Wells/Kit

 

1.Диагностический набор ИФАПринцип

Этот набор для обнаружения основан на конкурентном иммуноферментном анализе для обнаружения AMOZ в образцах.Конъюгированные антигены предварительно наносят на микролуночные стрипы.AMOZ в образце конкурирует с конъюгированным антигеном, предварительно нанесенным на микролуночную полоску, за антитело против AMOZ.После добавления ферментного конъюгата для окрашивания добавляют субстрат ТМБ.Значение оптической плотности (ОП) образца отрицательно коррелирует с АМОЗ в нем.Это значение сравнивается со стандартной кривой, после чего определяется концентрация AMOZ.

 

2. Технические характеристики

 

Чувствительность: 0,03ppb

Температура инкубации: 25 ℃

Время инкубации: 30 мин ~ 15 мин

Предел обнаружения Ткань, яйцо, мед: 0,1 частей на миллиард

Скорость перекрестной реакции

АМОЗ 100%

АХД < 0,1%

АОЗ < 0,1%

СЭМ < 0,1%

Скорость восстановления

Ткань 80 ± 25%

Мед 75 ± 25%

Яйцо 95 ± 25%

 

3.Нитрофуран AMOZ ELISA Набор для испытаний на безопасность пищевых продуктов​Составные части

 

1	Полоски для микролунок	12 полосок по 8 съемных скважин каждый
2	6-кратный стандартный раствор (по 1 мл каждого)	0ppb	0,03 частей на миллиард
		0,09 частей на миллиард	0,27 частей на миллиард
		0,81 частей на миллиард	2,43 частей на миллиард
3	Ферментный конъюгат	7мл	красный колпачок
4	Рабочий раствор антител	7мл	синяя кепка
5	Субстрат А	7мл	белая кепка
6	СубстратB	7мл	черная кепка
7	Остановить решение	7мл	желтая кепка
8	20-кратный концентрированный промывочный буфер	40мл	белая кепка
9	2× концентрированный раствор для повторного растворения	50мл	прозрачная крышка
10	2-нитробензальдегид (C7H5NO3)	2-нитробензальдегид (C7H5NO3)	2-нитробензальдегид (C7H5NO3)

 

 

4. Необходимые, но не предоставленные материалы
1) Оборудование: планшет-ридер, принтер, гомогенизатор, осушитель азота, вортекс, центрифуга, мерная пробирка, весы (обратные 0,01 г), инкубатор, водяная баня;
2) Микропипетки: одноканальные 20-200 мкл, 100-1000 мкл, многоканальные 30-300 мкл;
3) Реагенты: NaOH, этилацетат, н-гексан, HCl (около 36,5%), K2HPO4 3H2O

5. Подготовка образцов

инструктировать
Перед любой предварительной обработкой проб необходимо решить следующие вопросы:
1) В эксперименте можно использовать только одноразовые наконечники, и наконечники необходимо заменять при аспирации различных реагентов;
2) Перед экспериментом каждое экспериментальное оборудование должно быть очищено и при необходимости повторно очищено, чтобы избежать загрязнения, влияющего на результаты эксперимента.

Подготовка раствора перед предварительной обработкой образца:
1) 0,1 М K2HPO4: Растворите 11,4 г K2HPO4 3H2O в деионизированной воде до 500 мл.
2) 1 М HCl: растворить 8,6 мл HCl (около 36,5%) в деионизированной воде до 100 мл.
3) 1 М NaOH: растворить 4 г NaOH в деионизированной воде до 100 мл.
4) Разбавьте 2-кратный концентрированный раствор для повторного растворения деионизированной водой в соотношении 1:1 (1 мл концентрированного раствора для повторного растворения + 1 мл деионизированной воды) для повторного растворения образца.

 

5.1 Подготовка проб

а)Салфетка, яйца
1) Взвесьте 1 ± 0,05 г гомогенного образца, добавьте в каждую пробирку 4 мл дистиллированной воды, 0,5 мл 1M HCl и 100 мкл 2-нитробензальдегида (C7H5NO3) и встряхивайте надлежащим образом в течение 2 минут;
2) Инкубировать в течение ночи при 37°С (около 16 часов) или на водяной бане при 56°С (2 часа).
3) Добавьте в каждую пробирку 5 мл 0,1 М K2HPO4, 0,4 мл 1 М NaOH и 6 мл этилацетата и встряхивайте в течение 30 секунд.
4) Центрифугировать при комнатной температуре (20-25°С) со скоростью выше 4000 об/мин в течение 10 мин (если происходит эмульгирование или слой этилацетата менее 3 мл, инкубировать образец на водяной бане при 80°С в течение 10 мин и центрифугировать несколько раз или увеличьте скорость и продлите время центрифугирования).
5) Перенести слой этилацетата объемом 3 мл в новую центрифужную пробирку и выпарить досуха азотом или воздухом при 50°C.
6) Сухой остаток растворить в 2 мл н-гексана, добавить 1 мл разведенного восстановленного раствора, хорошо перемешать в течение 30 секунд, центрифугировать при комнатной температуре (20-25°С) со скоростью не менее 4000 об/мин в течение 10 минуты;удаляют верхнюю н-гексановую фазу.(Если происходит эмульгирование, удалите верхнюю н-гексановую фазу, инкубируйте образец на водяной бане при 70°C в течение 10-20 минут и повторно центрифугируйте).
7) Взять 50 мкл нижнего слоя на анализ.
Коэффициент разбавления образца: 2

б) мед
1) Взвесьте 2 ± 0,05 г однородного образца (меда), добавьте в каждую пробирку 4 мл дистиллированной воды, 0,5 мл 1 М HCl и 100 мкл 2-нитробензальдегида (C7H5NO3), встряхивайте соответствующим образом в течение 2 минут;
2) Инкубировать в течение ночи при 37°С (около 16 часов) или на водяной бане при 56°С (2 часа).
3) Добавьте в каждую пробирку 5 мл 0,1 М K2HPO4, 0,4 мл 1 М NaOH и 6 мл этилацетата и встряхивайте в течение 30 секунд.
4) Центрифугировать при комнатной температуре (20-25°С) со скоростью выше 4000 об/мин в течение 10 мин (при наличии эмульгирования или этилацетатного слоя менее 3 мл повторно центрифугировать образец на водяной бане при 80°С в течение 10 мин; или увеличьте скорость и продлите время центрифугирования).
5) Перенести слой этилацетата объемом 3 мл в новую центрифужную пробирку и выпарить досуха азотом или воздухом при 50°C.
6) Сухой остаток растворить в 2 мл н-гексана, добавить 1 мл разведенного восстановленного раствора, хорошо перемешать в течение 30 секунд, центрифугировать при комнатной температуре (20-25°С) со скоростью 4000 об/мин и более в течение 10 минут;удаляют верхнюю н-гексановую фазу.(Если происходит эмульгирование, удалите верхнюю н-гексановую фазу, инкубируйте образец на водяной бане при 70°C в течение 10-20 минут и повторно центрифугируйте).
7) Взять 50 мкл нижнего слоя на анализ.
Коэффициент разбавления образца: 1

 

 

6. Процедура ИФА

6.1 Описание
1) Перед использованием доведите все реагенты и микролуночные полоски до комнатной температуры (20-25°C);
2) Сразу же после использования доведите температуру всех реагентов до 2-8°C;
3) Воспроизводимость анализов ELISA в значительной степени зависит от консистенции промывки планшета.Правильная работа промывки планшетов является ключом к процедуре ELISA;
4) Во время инкубации при постоянной температуре все образцы и реагенты должны быть защищены от света, а каждый микропланшет должен быть закрыт защитной пленкой.

6.2 Порядок работы
1) Поместите набор при комнатной температуре (20–25 °C) не менее чем на 30 минут, обратите внимание, что каждый реагент необходимо встряхнуть и хорошо перемешать перед использованием, и поместите необходимые полоски микропланшета в рамку планшета.Неиспользованные микропланшеты следует запечатать и хранить при температуре 2-8°C, не замораживая.
2) Приготовление раствора: 40 мл 20-кратного концентрированного промывочного буфера, разбавленного 1:19 деионизированной водой (1 часть 20-кратного концентрированного промывочного буфера + 19 частей деионизированной воды).Или подготовить по мере необходимости.
3) Нумерация: Пронумеруйте микролунки в соответствии с образцами и стандартными растворами;каждый образец и стандартный раствор должны быть сделаны в двух экземплярах, и их положение должно быть записано.
4) Добавьте 50 мкл образца или стандартного раствора в отдельные лунки для повторения;добавьте 50 мкл ферментного конъюгата в каждую лунку, затем добавьте 50 мкл рабочего раствора антител и встряхните планшет вручную, чтобы аккуратно перемешать.Закройте микропланшет пленкой и инкубируйте при 25°C в течение 30 минут.
5) Вылейте жидкость в микролунку, промокните абсорбирующей бумагой, добавьте 250 мкл/лунку промывочного буфера, чтобы промыть микропланшет в течение 15–30 секунд, затем выньте и промокните абсорбирующей бумагой, повторите 4–5 раз.(Если после постукивания остались пузырьки воздуха, срежьте их чистым наконечником).
6) Развитие окраски: добавьте в каждую лунку 50 мкл субстрата А, затем 50 мкл субстрата В. Аккуратно перемешайте, встряхивая планшет вручную, затем инкубируйте в темноте при 25 °C в течение 15 минут для проявления окраски.
7) Анализ: добавьте в каждую лунку по 50 мкл стоп-раствора.Аккуратно перемешайте, встряхивая планшет вручную.Установите длину волны устройства для чтения микропланшетов на 450 нм, чтобы определить значение оптической плотности каждой лунки.(Рекомендуется считывать значения оптической плотности на двух длинах волн 450/630 нм в течение 5 минут).

 

7. Результат оценки

 

Существует два метода оценки результатов: первый — это грубая оценка, а второй — количественное определение.Обратите внимание, что значение OD образца имеет отрицательную корреляцию с концентрацией AMOZ.

7.1 Качественное определение

Диапазон концентраций (нг/мл) AMOZ может быть получен путем сравнения среднего значения оптической плотности образца со значением ОП стандартного раствора.Предполагая, что значение OD образца Ⅰ составляет 0,3, а значение OD образца Ⅱ равно 1,0, значение OD стандартных растворов составляет: 2,243 для 0 частей на миллиард, 1,816 для 0,03 частей на миллиард, 1,415 для 0,09 частей на миллиард, 0,74 для 0,27 частей на миллиард, 0,313 для 0,81 частей на миллиард. , 0,155 для 2,43 частей на миллиард, соответственно диапазон концентраций образца Ⅰ составляет от 0,81 до 2,43 частей на миллиард, а диапазон концентраций образца Ⅱ составляет от 0,09 до 0,27 частей на миллиард.

7.2 Количественное определение

Средние значения значений абсорбции получают для среднего значения ОП (В) образца и стандартного раствора, деленного на значение ОП (В0) первого стандартного раствора (0 стандарт) и впоследствии умноженного на 100%, т.е. ,

Процент значения поглощения =	Б	×100%
	B0

B — среднее значение ОП образца или стандартного раствора.

B0 — среднее значение ОП стандартного раствора с концентрацией 0 нг/мл.

Нарисуйте стандартную кривую с процентами абсорбции стандартного раствора и полулогарифмическими значениями стандартного раствора AMOZ (нг/мл) по осям Y и X соответственно.Считайте соответствующую концентрацию образца со стандартной кривой, включив процент его абсорбции в стандартную кривую.Полученное значение впоследствии умножается на соответствующую кратность разбавления, в результате чего получается концентрация AMOZ в образце.

 

8. Вопросы, требующие внимания
1) Комнатная температура ниже 25 ℃ или температура реагента и образец не вернулись к комнатной температуре (20-25 ℃), что приведет к снижению стандартного значения OD.
2) В процессе промывки высыхание микропланшета будет сопровождаться нелинейностью стандартной кривой и неудовлетворительной воспроизводимостью;поэтому переходите к следующему шагу сразу после стирки.
3) Хорошо перемешайте, иначе будет плохая воспроизводимость.
4) Стоп раствором является 2 М раствор серной кислоты, избегайте контакта с кожей.
5) Не используйте набор по истечении срока годности.Использование разбавленных или фальсифицированных реагентов из набора может привести к изменению чувствительности и значений оптической плотности обнаружения.Не заменяйте реагенты из разных партий наборов.
6) Запечатайте неиспользованные микропланшеты в самозакрывающихся пакетах.Стандартные растворы и бесцветные соединители светочувствительны и не могут подвергаться прямому воздействию света.
7) Утилизируйте любой красящий раствор, цвет которого указывает на то, что раствор разложился.Значение обнаружения менее 0,5 для стандартного раствора 1 (0 частей на миллиард) указывает на деградацию.
8) Оптимальная температура реакции составляет 25 ℃, а чувствительность обнаружения и значение оптической плотности изменяются, если температура слишком высокая или слишком низкая.
 

9. Хранение и срок действия
Хранение: Хранить при температуре 2-8°С, не замораживать.
Срок годности: 12 месяцев;дата производства указана на коробке.
Примечание. Если вакуумная упаковка микропланшета протекает, ее все равно можно использовать, не влияя на результаты теста, поэтому вы можете использовать ее с уверенностью.

 

 

Q1: Когда он будет отправлен?
A1: Мы отправим вам товар как можно скорее в течение 7 рабочих дней после получения оплаты.(В случае внешних факторов, таких как эпидемия, доставка может быть отложена)

 

Q2: Поддерживает ли он OEM/ODM?
A2: Он может поддерживаться, но конкретное количество должно быть более 100 000 штук, что удобно для индивидуальных продуктов.

 

Q3: Как ваша фабрика делает с точки зрения контроля качества?
A3: У нас есть национальные сертификаты ISO9001 и ISO13485.Наш производственный процесс соответствует стандартным процедурам для обеспечения оптимального качества продукции.

 

Q4: Как обеспечить послепродажное обслуживание?
A4: Мы предоставляем профессиональное онлайн-техническое послепродажное обслуживание.Мы можем предоставить вам индивидуальное руководство по видео, телефону и т. д.

 

В5: какой способ оплаты?
A5: мы получаем оплату через T/T.

 

Q6: Как отправить?
A6: Выберите лучший для вас способ доставки, получив предложения от наших многочисленных совместных перевозчиков, а также отправьте товар в соответствии с вашими требованиями.