Тест ELISA набора нитрофурана AOZ для чувствительности 0.01ppb 96Wells/Kit меда креветки рыб

Набор теста нитрофурана AOZ ELISA для чувствительности 0.01ppb 96Wells/Kit меда креветки рыб

 

1. Принцип

Этот fнабор теста безопасности ood быстрыйосновывает на конкурсном immunoassay энзима для обнаружения AOZ в образце. Соединяя антигены пре-покрыты на микро--хорошо нашивках. AOZ в образце и соединяя антигенах пре-покрытых на микро--хорошо нашивках состязаются для анти--AOZ антител. После того как добавление конъюгата энзима, субстрат TMB добавлено для колорита. Значение оптически плотности (OD) образца имеет отрицательную корреляцию с AOZ в нем. Это значение сравнено к стандартной кривой и концентрация AOZ затем получена.

2. Компоненты

1	Микро--хорошо прокладки	12 прокладки с 8 съемным колодцы по каждому
2	стандартное решение 6× (1mL каждое)	0ppb	0.01ppb
		0.03ppb	0.09ppb
		0.27ppb	0.81ppb
3	Конъюгат энзима	7ml	красная крышка
4	Рабочий раствор антитела	7ml	голубая крышка
5	Субстрат a	7ml	белая крышка
6	SubstrateB	7ml	черная крышка
7	Остановите решение	7ml	желтая крышка
8	20× сконцентрировало моя буфер	40ml	белая крышка
9	2× сконцентрировало перерастворять решение	50ml	прозрачная крышка
10	2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3)	10ml	черная крышка

 

3. Технические данные

Чувствительность: 0.01ppb

Температура инкубации: 25℃

Время инкубации: 30min~15min

Предел обнаружения

Ткань, яйцо, мед: 0.05ppb

Тариф перекрестной реакции

AOZ 100%

AMOZ <0>

AHD <0>

SEM <0>

Скорость восстановления

Ткань, яйцо 95±25%

Мед 85±23%

 

4. Не обеспечиваемые материалы требуемые но

1) Оборудования: читатель microplate, принтер, гомогенизатор, прибор азот-засыхания, вортекс, центрифуга, измеряя капает из пипетки, баланс (взаимная чувствительность 0,01 g), инкубатор, вода - ванна;

2) Micropipettors: одноканальное µL 20-200 µL, 100-1000, и µl мульти-канала 30~300;

3) Реагенты: NaOH, этиловый эфир уксусной кислоты, н-гексан, HCI (приблизительные 36,5%), K2HPO4·3H2O

 

5. Пре-обработка образца

Инструкции

Следующие пункты необходимо общаться с перед пре-обработкой сколько угодно вида образца:

1) Только устранимые подсказки можно использовать для экспериментов и подсказки необходимо изменить при использовании для поглощения различных реагентов;

2) Перед экспериментом, каждое экспириментально оборудование должно быть чисто и должно бытьочищено при необходимости, во избежание загрязнение которое мешает с экспириментально результатами.

Подготовка решения перед пре-обработкой образца:

1) 0,1 M K2HPO4: растворите g 11,4 K2HPO4·3H2O в деионизированной воде к 500mL.

2) HCl 1 m: растворите 8.6mL HCI (приблизительные 36,5%) в деионизированной воде к 100mL.

3) NaOH 1 m: растворите NaOH 4g в деионизированной воде к 100mL.

4) 2×concentrated перерастворяя решение разбавлено с деионизированной водой на 1:1 (1mL сконцентрировало перерастворять решение + деионизированную 1mL воду), используемом для перерастворять образца.

 

5,1 подготовка образцов

a)Ткань, яйцо

1) Весьте 1± 0.05g гомогенизированного образца, добавляйте 4mL дистиллированной воды, 0.5mL 1 m HCI и 100µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) к каждой трубке, трясут как следует для 2min;.

2) Инкубируйте at37℃ над ночью (часами approx16) или инкубируйте at56℃ водой - ванной (2 часами).

3) Добавьте 5mL 0.1M K2HPO4, NaOH 0.4mL 1M и 6mL этиловый эфир уксусной кислоты к каждой трубке, встряхивание для 30s.

4) Центрифуга на вышеуказанном 4000r/min на комнатной температуре (℃ 20-25) для 10min (если эмульгация или слой этиловый эфир уксусной кислоты нет достаточно для 3ml, то не инкубируйте образец на воде 80 ℃ - ванне для 10min и центрифуги повторно; или увеличьте скорость и продлите время центрифуги).

5) Передача 3mL слоя этилового эфира уксусной кислоты в новую центробежную трубку и испариться к засохлости азотом или воздухом на 50℃.

6) Растворите сухие остатки в н-гексане 2mL, добавьте 1mL разбавленного перерастворяя решения, смешивание как следует на 30 секунд, центрифуга на над 4000 r/min на комнатной температуре (℃ 20-25) на минута 10; Извлеките участок н-гексана вверх-слоя (если эмульгация, после извлекать участок н-гексана вверх-слоя, то инкубируйте образец на воде 70 ℃ - ванна для 10-20min, центрифугует повторно).

7) Примите 50 µL низкой для анализа.

Створка разбавления образца: 2

 

b) Мед

1) Весьте 2± 0.05g гомогенизированного образца (меда), добавляйте 4mL дистиллированной воды, 0.5mL 1 m HCI и 100 µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) к каждой трубке, трясет как следует для 2min;.

2) Инкубируйте at37℃ над ночью (часами approx16) или инкубируйте at56℃ водой - ванной (2 часами).

3) Добавьте 5mL 0.1M K2HPO4, NaOH 0.4mL 1M и 6mL этиловый эфир уксусной кислоты к каждой трубке, встряхивание для 30s.

4) Центрифуга на вышеуказанном 4000r/min на комнатной температуре (20-25℃) для 10min (если эмульгация или слой этиловый эфир уксусной кислоты нет достаточно для 3ml, то не инкубируйте образец на воде 80 ℃ - ванне для 10min и центрифуги повторно; или увеличьте скорость и продлите время центрифуги).

5) Передача 3mL слоя этилового эфира уксусной кислоты в новую центробежную трубку и испариться к засохлости азотом или воздухом на ℃ 50.

6) Растворите сухие остатки в н-гексане 2mL, добавьте 1mL разбавленного перерастворяя решения, смешивание как следует на 30 секунд, центрифуга на над 4000r/min на комнатной температуре (℃ 20-25) на минута 10; Извлеките участок н-гексана вверх-слоя (если эмульгация, после извлекать участок н-гексана вверх-слоя, то инкубируйте образец на воде 70 ℃ - ванна для 10-20min, центрифугует повторно).

7) Примите 50 µL низкой для анализа.

Створка разбавления образца: 1

 

6. Процедуры по ELISA

6,1 Инструкции

1) Принесите все реагенты и микро--хорошо прокладки к комнатной температуре (℃ 20-25) перед использованием;

2) Возвратите все реагенты в ℃ 2-8 немедленно после пользы;

3) Воспроизводимость анализа ELISA, в значительной степени, зависит от последовательности стирки плиты. Правильная деятельность мыть плиты узловой пункт в ELISA процедуры;

4) Для инкубации на температурах постоянного, все образцы и реагенты должны избежать светлой выдержки, и каждое microplate должно быть загерметизировано мембраной крышки.

 

6,2 Правила технической эксплуатации

1) Принесите набор теста к комнатной температуре (℃ 20-25) на по крайней мере минута 30, заметьте что каждый реагент необходимо трясти для того чтобы смешать равномерно перед использованием, положите необходимые микро--хорошо прокладки в рамки плиты. Заново герметизировал неиспользованное microplate, магазин на не замерли ℃ 2-8, который.

2) Подготовка решения: разбавьте 40mL 20 буфера сконцентрированного × моя с деионизированной водой на 1:19 (буфере стирки 1 части 20 сконцентрированном × + 19 частей деионизированной воды). Или подготовьте как нужно.

3) Оцифровка: номер микро-колодцы согласно образцам и стандартному решению; каждые образец и стандартное решение должны быть выполнены в дубликате, показателе их положения.

4) Добавьте µL 50 образца или стандартного решения в отдельные двойные колодцы; добавьте 50 энзим ul спрягает после этого µL 50 рабочего раствора антитела в каждый колодец, смешивание нежно путем трясти плиту вручную. Загерметизируйте microplate с мембраной крышки, andincubate на 25 ℃ for30min.

5) Полейте жидкость из microwell, щитка для того чтобы высушить на бумаге вещество-поглотителя, добавьте 250 µL/well моя буфера для того чтобы помыть microplate для 15-30 s, после этого примите вне и хлопните для того чтобы высушить с бумагой вещество-поглотителя, повторением 4-5 раз. (Если пузыри после хлопать, то отрезали их с чистыми подсказками).

6) Колорит: добавьте µL 50 µL субстрата a и после этого 50 субстрата b в каждый колодец. Смешайте нежно путем трясти плиту вручную, тогда инкубируйте на 25 ℃ for15min на темноте для колорита.

7) Определение: добавьте 50 µL останавливает решение в каждый колодец. Смешайте нежно путем трясти плиту вручную. Установите длину волны читателя microplate на 450nm для того чтобы определить значение OD каждого колодца. (Порекомендуйте прочитать значение OD на двойн-длине волны 450/630nm не позднее 5 минут).

 

7. Суждение результата

2 метода для того чтобы судить результаты: первое одно грубое суждение, пока второе количественное определение. Примечание что значение OD образца имеет отрицательную корреляцию с концентрацией AOZ.

7,1 качественное определение

Ряд концентрации (ng/mL) AOZ можно получить от сравнивать среднее значение OD образца с этим из стандартного решения. Высказывать предположение о том, что значение OD образцаⅠ 0,3, и это из Ⅱ образца 1,0, значение OD стандартных решений является следующим: 2,243 для 0ppb, 1,816 для 0.01ppb, 1,415 для 0.03ppb, 0,74 для 0.09ppb, 0,313 для 0.27ppb, 0,155 для 0.81ppb, соответственно ряд концентрации Ⅰ образца 0.27ppb к 0.81ppb, и это из Ⅱ образца 0.03ppb к 0.09ppb.

7,2 количественное определение

Средние значения значений absorbance получены для среднего значения OD (b) образца и стандартного решения разделенного значением OD (B0) первого стандартного решения (0 стандартов) и затем умноженного к 100%, т.е.,

 

Процент значения absorbance =	B	×100%
	B0

 

Значение OD среднего B-the образца или стандартного решения

Значение OD среднего B0-the 0 решений ng/mL стандартных

Нарисуйте стандартную кривую с процентами абсорбции стандартного решения и значениями semilogarithm решения AOZ стандартного (ng/mL) как Y- и X-ось, соответственно. Прочитайте соответствуя концентрацию образца от стандартной кривой путем включать свой процент абсорбции в стандартную кривую. Приводя значение затем умножено соответствуя створкой разбавления, в конце концов получая концентрацию AOZ в образце.

 

8. Меры предосторожности

1) Комнатная температура под ℃ 25 или температура реагентов и образцов не возвращающ в комнатную температуру (℃ 20-25) приведут к более низкому стандартному значению OD.

2) Засохлость microplate в моя процессе будет сопровожена ситуациями включая нелинейные стандартные кривые и нежелательную воспроизводимость; Так продолжайтесь к следующему шагу немедленно после стирки.

3) Смешайте равномерно, в противном случае будет нежелательная воспроизводимость.

4) Остановите решение решение масляной серной кислоты 2 m, избегите контактировать с кожей.

5) Не используйте набор превышая свой срок годности. Польза разбавленных или фальсифицированных реагентов от наборов приведет к изменениям в чувствительности и обнаруживая значениях OD. Не обменяйте реагенты от наборов различных серий для использования.

6) Положите неиспользованное microplate в сумку автоматическ-запечатывания для того чтобы заново герметизировать ее. Стандартное решение и бесцветный цвет бывшие светочувствительный, и таким образом они нельзя сразу подвергнуть действию света.

7) Сбросьте решение колорита с любым цветом который показывает вырождение этого решения. Обнаруживая значение стандартного решения 1 (0 ppb) меньше чем 0,5 показывает свое вырождение.

8) Оптимальная температура реакции ℃ 25, и слишком высокие или слишком низкие температуры приведут в изменениях в обнаруживая чувствительности и значениях OD.

 

9. Хранение и срок годности

Хранение: магазин на не замерли ℃ 2-8, который.

Срок годности: 12 месяца; дата продукции на коробке.

Примечание: Если пакет вакуума microplate имеет утечку, то он все еще действителен для использования, не влияет на результат теста, ослабить для использования.

 

 

Q1: Сколько времени оно примет для вас для того чтобы грузить?
A1: Обычно корабли не позднее 7 рабочих дней.

 

Q2: Вы поддерживаете OEM/ODM?
A2: смогите быть поддержано. Мы можем подгонять согласно вашим специфическим потребностям и специфическим количествам.

 

Q3: Как ваша фабрика делает по отоношению к проверке качества?
A3: Мы имеем аттестацию ISO9001 и ISO13485 аттестация, до сих пор полностью производственный процесс, мы имеем стандартные правила, мы исполняем с уместными поведением и законами правительства.

 

Q4: Послепродажное обслуживание гарантировано?
A4: Мы обеспечиваем профессиональное онлайн техническое послепродажное обслуживание. Если продукт терпит неудачу во время эксперимента, то мы можем обеспечить
взаимнооднозначное наведение через телефон, видео и другие формы.

 

Q5: Что ваше количество минимального заказа?
A5: 1Kit.

 

Q6: Что грузя метод?
A6: Оно может быть погружен срочным (FEDERAL EXPRESS, UPS, DHL, EMS, etc.) или самолетом и землей. Пожалуйста подтвердите с нами перед делать заказ заказ.